期刊简介
本刊2001年12月创刊。由卫生部主管、中国医学科学院主办，阜外心血管病医院承办，是以基础与临床相结合为特点的分子心血管病专业学术期刊。自创刊以来，期刊质量不断提高，先后被中国科学技术信息研究所万方数据库、中国学术期刊全文数据库（CNKI）、重庆维普资讯数据库等收录。2006年起被万方数据库的《中国科技核心期刊数据库》收录。
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首页>中国分子心脏病学杂志
- 杂志名称：中国分子心脏病学杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医学科学院；中国协和医学院
- 国际刊号：1671-6272
- 国内刊号：11-4726/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
慢病毒载体表达人B型利钠肽的方法学探索
刘向阳；卢永昕；李小青；刘隽；李爱华；罗萍；朱纪法；李锋
关键词：慢病毒载体, 载体构建, B型利钠肽, 成肌细胞, 基因表达
摘要：目的探索构建能表达人B型利钠肽(hBNP)的pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP载体的方法,以实现人B型利钠肽基因在骨骼肌成肌细胞中长久、稳定的表达.方法将目的基因人B型利钠肽(hBNP)亚克隆到真核细胞表达载体pLenti6/V5-D-TOPO载体上,构建重组质粒pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP.将pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP及阳性对照质粒pLenti6/V5-D-TOPO-GFP分别用lipo-fectamin 2000介导转染293FT细胞,获得病毒颗粒;用病毒颗粒转染体外培养的SD乳鼠骨骼肌成肌细胞.荧光显微镜下计数确定阳性对照质粒的瞬时转染数,从而估计该基因的瞬时转染效率.加入筛选试剂以获得稳定表达异源B型利钠肽(BNP)的成肌细胞.收集瞬时转染及筛选后的细胞培养基,用酶连结免疫吸附分析(ELISA)检测试剂盒检测人B型利钠肽(hBNP)的表达水平.结果聚合酶链式反应法及DNA测序显示人B型利钠肽基因成功地插入到pLenti6/V5-D-TOPO载体中;阳性对照质粒转染细胞12 h后,在荧光显微镜下观察,其转染效率达60%以上.检测收集的上清,结果与阴性对照有显著差别(P＜0.01),观察至第4周,人B型利钠肽(hBNP)仍持续稳定表达.结论本实验成功构建了能在真核细胞内表达人B型钠尿肽的重组质粒pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP,并且取得了较高的转染效率,因此慢病毒载体介导的基因治疗在心血管疾病中有乐观的应用前景.
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